Este proyecto ha desarrollado herramientas que permitan identificar animales infectados con virus Orf. Para ello se ha empleado un enfoque multiplataforma consistente en la detección de virus en las pústulas mediante métodos moleculares y la reacción serológica (presencia de anticuerpos) mediante ELISA. Así, hemos demostrado la presencia de anticuerpos tanto en animales con síntomas como en animales infectados en fase asintomática.
La confirmación de Orf en lesiones bucales es necesaria para el diagnóstico diferencial con infecciones por diferentes virus como los del Papiloma, Herpes, etc. Así, los métodos de PCR clásica desarrollados en este proyecto permiten diagnosticar, sin problemas de especificidad, aquellas lesiones causadas por Orf.
Para la cuantificación de virus en las pústulas o en otro tipo de muestras como sobrenadantes de cultivo celular, se ha desarrollado una estrategia de PCR en tiempo real.
La identificación de los animales infectados es una estrategia fundamental en la implantación de programas de control y para evitar la introducción de animales potencialmente peligrosos en las explotaciones indemnes o de alto riesgo. El proyecto ha supuesto el desarrollo y la puesta a punto de un método serológico para la identificación de animales infectados con virus Orf con o sin síntomas.Esta herramienta es la única que permite detectar la infección en fases asintomáticas permitiendo establecer medidas preventivas en la importación de animales tanto al nivel de rebaño como al nivel regional.
En conjunto el proyecto CONECTIM (PC071-072 y PC052-053) ha contribuido con el primer aislamiento y caracterización genética de cepas del virus Orf, causante del EC, en nuestro país. Además, hemos demostrado la presencia de anticuerpos en la sangre de los animales infectados a través del desarrollo de un ELISA capaz de identificar animales infectados. La disponibilidad de aislados nos ha permitido preliminarmente establecer cultivos celulares en los que replicar el virus y realizar estudios de PCR y secuenciación con los que hemos caracterizado las primeras secuencias de Orf de nuestro entorno. La caracterización genética ha revelado la presencia de virus parecidos a los previamente descritos en Alemania o Estados Unidos. Finalmente,la obtención de las primeras secuencias completas del virus Orf asegura estudios futuros en los que identificar dianas tanto diagnósticas como terapéuticas y de vacunación.
