ECTICONA

El Ectima Contagioso (EC) es una enfermedad viral, causada por el parapoxvirus Orf, que afecta a rumiantes causando úlceras en las mucosas faciales, pezones y pezuñas, y que también puede afectar a humanos. En los casos menos graves, la presencia de las lesiones en animales dificulta la alimentación y afecta, tanto al estado sanitario como a la ganancia diaria de peso. La afectación es elevada en el ganado ovino de Navarra estimándose pérdidas económicas considerables derivadas de la propia infección y de los gastos sanitarios. Estos gastos se centran en la adquisición de antibióticos para paliar infecciones bacterianas secundarias (mastitis y pododermatitis) ya que no se dispone de tratamiento o vacuna frente al EC. Los brotes se originan en parte tras la adquisición de animales procedentes de zonas con alta prevalencia, sin embargo, en la actualidad no disponemos de herramientas biotecnológicas validadas que nos permitan identificar los animales infectados.

Este proyecto ha empleado pruebas ELISA desarrolladas en proyectos anteriores para realizar un estudio sero-epidemiológico en Navarra. Para ello, se han obtenido más de 1500 muestras de 80 rebaños que hemos analizado identificando animales positivos en un 88% de ellos. En cada explotación se ha realizado una encuesta a todos los ganaderos, que ha evidenciado el grave problema que supone el Ectima Contagioso en los rebaños navarros y la necesidad del desarrollo de vacunas.

La identificación de los animales infectados es una estrategia fundamental en la implantación de programas de control y para evitar la introducción de animales potencialmente peligrosos en las explotaciones indemnes o de alto riesgo. El proyecto ha supuesto la validación en campo de un método serológico ELISA para la identificación de animales infectados con virus Orf con o sin síntomas (Figura 1).

Esta herramienta ha posibilitado identificar animales seropositivos en la gran mayoría de explotaciones analizadas de manera específica (Figura 2).

La presencia de animales seropositivos no coincide siempre con la ocurrencia de brotes, y podría estar relacionada con campañas de vacunación pasadas, que consistían en la inoculación de virus vivo atenuado e imposibilitaban la implantación de estrategias DIVA, que diferencian animales infectados de aquellos inmunizados. De acuerdo con las encuestas realizadas hasta un 69% de las explotaciones han presentado brotes de la enfermedad en los últimos cinco años, pero tan solo un 55% de ellos resultaron positivos en ELISA. Por otro lado, un 21% de las explotaciones no presentaron brotes, pero sí animales seropositivos, probablemente derivados de vacunaciones con virus vivo atenuado. En nuestro territorio la enfermedad se presenta con las formas bucal y mamaria predominantemente, dos formas clínicas que afectan al rendimiento de los corderos y al de la producción lechera, respectivamente.
En un segundo objetivo, este proyecto ha desarrollado vectores virales basados en el virus de ratón Sendai (SeV), en los que se ha introducido genes inmunogénicos del virus Orf. En concreto se emplearon dos inóculos correspondientes a las proteínas B2L y 0059 codificadas por el virus Orf. Aprovechando la capacidad de infección del tracto respiratorio de SeV, sus capacidades inmunoestimulantes, así como la expresión de una gran cantidad de proteína correspondiente al transgen, se inmunizaron 4 grupos de animales adultos procedentes de explotaciones sin historial ni reacción serológica al virus Orf.

• Grupo control: inoculado con medio de cultivo.
• Grupo Sendai vacío (SeV-GFP): inoculado con el vector Sendai que expresa la proteína verde fluorescente, sin genes del virus Orf.
• Grupo inmunizado con B2L (SeV-B2L): inoculado con el vector Sendai que expresa la proteína verde fluorescente, y el gen B2L del virus Orf.
• Grupo inmunizado con 0059 (SeV-0059): inoculado con el vector Sendai que expresa la proteína verde fluorescente, y el gen 059 del virus Orf.

Se realizaron dos inmunizaciones intranasales idénticas y dos infecciones experimentales con virus Orfaislado en el laboratorio en el marco del proyecto anterior. Los animales del grupo control desarrollaron la enfermedad en un 45%, los inoculados con el vector vacío tan solo un 18%. Por otro lado, los animales inmunizados con B2L mostraron enfermedad en un 63%, mientras que los inmunizados con SeV-0059 no mostraron ningún signo de enfermedad. Además, tan solo estos animales mostraron un nivel detectable de anticuerpos frente a Orf en el suero tras la infección experimental (Figura 3).

En conjunto el proyecto ECTICONA (PC080) junto con los anteriores (CONECTIM: PC071-072 y PC052-053) ha contribuido con el primer aislamiento y caracterización genética de cepas del virus Orf, causante del EC, en nuestro país. Además, hemos demostrado la presencia de anticuerpos en la sangre de los animales infectados, a través del desarrollo de un ELISA capaz de reconocer animales seropositivos y se ha aplicado a un gran número de muestras de campo identificando una gran mayoría de explotaciones con animales seropositivos en Navarra. La importancia de la enfermedad para la industria ganadera navarra queda patente en el resultado de las encuestas realizadas, que refieren el EC como una enfermedad que merma la productividad de la ganadería ovina y destaca la necesidad de desarrollar herramientas que permitan su control. La disponibilidad del sistema de genética reversa del virus Sendai nos ha permitido desarrollar vectores virales recombinantes como vacunas frente al EC. Los resultados en animales adultos muestran la gran potencialidad de la vacuna SeV-059 para conferir protección frente a la infección experimental con el virus Orf.

Este proyecto ha proporcionado una prueba de concepto en el control del EC a través de la identificación de animales seropositivos mediante ELISA y la protección de animales adultos frente a la enfermedad tras la infección experimental. Los resultados deberían garantizar la realización de ensayos clínicos en la población más susceptible (corderos) así como en madres gestantes, que nos proporcionaría la oportunidad de testar la transferencia pasiva de inmunidad a las crías. Así, el ELISA y la vacuna desarrolladas podrían contribuir de manera definitiva al control de la enfermedad mediante la aplicación de estrategias DIVA, y evitar el empleo de antibióticos para tratar esta infección, que en Navarra se aplica en el 60% de los casos.