Un paso critico para el desarrollo de inmunoterapias con tg-TCRs es la identificación de buenos Ags dianas. Glipican 3 (GPC3) se halla fuertemente expresado en la mayoría de hepatocarcinomas (75-84%), en tumores de ovario resistentes a quimioterapia y en el 50% de los carcinomas escamosos de pulmón, liposarcomas, melanomas y tumores testiculares no-seminomatosos, siendo indetectable en tejido normal. Diversos estudios indican que GPC3 es procesado y presentado en las células tumorales. Estas evidencias, junto a su expresión exclusiva en tejido tumoral, hacen a GPC3 un Ag diana interesante para la inmunoterapia con tg-TCRs. El segundo paso crítico es la identificación de TCRs específicos de tumor. Debido al mecanismo de selección clonal, la mayoría de los linfocitos T naturales específicos de TAAs presentan TCRs de baja afinidad y escasa actividad antitumoral. Un modo de obtener TCRs de buena afinidad es mediante el empleo de ratones transgénicos que expresen Moléculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC) humanas, como los ratones HHD-DR1 que expresan las moléculas HLA-A2.1 (clase I) y HLA-DR1 (clase II), de alta prevalencia en nuestra población. Estos modelos murinos han sido ampliamente utilizados como fuente de TCRs para aplicaciones clínicas.
En la primera anualidad de este proyecto nos propusimos:
1. Caracterizar y aislar linfocitos T específicos de hGPC3 en el modelo murino HHD-DR1.
2. Identificar, mediante NGS de “single cell”, los TCRs de los linfocitos T específicos de hGPC3.
Mediante la inmunización de ratones HHD-DR1 con la proteína hGPC3, nuestro grupo ha identificado diversos epítopes de hGPC3 capaces de activar linfocitos T CD8 murinos específicos de GPC3. Así mismo, hemos aislados como “célula única” linfocitos T específicos de dichos epítopes y se han secuenciando sus TCRs. Se han identificado 35 TCR específicos de GPC3.
Para la segunda anualidad del proyecto nos proponemos:
3. Clonar los TCRs identificados en vectores retrovirales.
4. Estudiar la actividad antitumoral de linfocitos T de sujetos HLA-A2.1+ transducidos con los tg- TCR específicos de hGPC3 en ensayos in vitro e in vivo.
Este estudio permitirá identificar TCR específicos de GPC3, con los que se podría llevar a cabo en un futuro un ensayo clínico en pacientes con tumores GPC3+HLA-A2.1+. Además, permitirá sentar las bases de una plataforma para la identificación y clonación de TCR específicos de Ags para posteriores desarrollos de estrategias de ACT en cáncer y otros tipo de enfermedades.
